核糖核酸酶A來源于牛胰腺

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產品信息

產品描述

核糖核酸酶A（Ribonuclease A，常用縮寫RNase A），一種含4個二硫鍵的單鏈多肽，分子量約為13.7kDa（氨基酸序列）。作為一種核糖核酸內切酶（endoribonuclease），特異性降解單鏈RNA上的胞嘧啶（C）或尿嘧啶（U）殘基。具體來說，切割識別的是由某核苷酸上的5’-核糖和相鄰的嘧啶類核苷酸3’-核糖上磷酸基團形成的磷酸二酯鍵，從而使得2’, 3’-環磷酸水解為對應的3’-核苷磷酸（比如，pG-pG-pC-pA-pG經RNase A切割產生pG-pG-pCp 和A-PG）。RNase A切割單鏈RNA活性high，推薦工作濃度為1-100μg/ml，兼容于各種反應體系。低鹽濃度（0-100mM NaCl），可用來切割單鏈RNA，雙鏈RNA，以及RNA-DNA雜交形成的RNA鏈。然而，高鹽濃度（≥0.3M），RNase A僅特異性切割單鏈RNA。

核糖核酸酶A（RNase A）常見的應用在于質粒DNA或基因組DNA制備過程中去除RNA，此制備過程中DNase酶活性的存在與否是需要重視的污染之一，可采用水浴煮沸這種傳統方法來滅活DNase活性。另外，本品還可用于RNA酶保護分析、RNA序列分析等分子生物學實驗。

產品屬性

外觀：白色凍干粉末

激活劑：鈉鹽、鉀鹽等

抑制劑：核酸酶抑制劑

失活方法：加熱不會失活，建議用離心柱或者酚氯fang抽提來充分去除

來源：牛胰腺

溶解性：溶于水（10mg/ml）

干燥失重：≤5.0%

酶活力：≥50 Kunitz units/mg   活性同sigma R4875

運輸和保存方法

冰袋運輸。-20℃干燥保存，3年有效。

注意事項

1） 本品在生產過程中已經過相應方法去除DNase污染，對于常規質粒DNA或者基因組DNA抽提（不需要嚴格定量DNA水平）的應用，可不需要高溫煮沸，直接配制母液即可。對于需要嚴格控制DNase酶殘留的實驗，建議高溫煮沸或者購買DNase-free, protease-free的RNase A溶液（10mg/ml）

2） RNase A會強吸附在玻璃器皿上，建議溶液裝到塑料離心管內。

3） 對于同時操作完整RNA實驗的研究人員，一定要謹防RNase A引入干擾試驗結果的準確性。

4） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 儲存液制備

注意：此為RNase A儲存液配制的常用方法之一，也可以根據實驗室傳統的方法，或者參考文獻資料使用其他方法制備儲存液（如直接溶于10mM Tris-Cl, pH7.5；或者Tris-NaCl溶液）。

1） 利用10mM的醋酸鈉（pH5.2）制備10mg/ml 的RNase A 儲存液；

2）  00℃加熱15min；

3） 冷卻到室溫，加入1/10體積的1M Tris-HCl（pH7.4），調其pH至7.4（例如，5ml 10mg/ml的RNase 儲存液加入500μl 1M Tris-HCl, pH7.4）；

4） 分裝于-20℃凍存，可穩定保存長達2年。

注意：在中性條件下煮沸RNase A溶液，會有RNase沉淀形成；在更低的pH下將其煮沸，如有沉淀可以觀察到，可能由于蛋白雜質存在造成。煮沸之后若發現沉淀，可通過高速離心（13,000 rpm）去除雜質，然后分裝凍存

注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
用途：本品僅供科研，不得用于其它用途。